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技術(shù)文章
非洲豬瘟檢測試劑盒備案-風(fēng)途為您供應(yīng)非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒（FT-FWSJ）。非洲豬瘟檢測試劑盒 為認(rèn)定的非洲豬瘟檢測試劑。
近日,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布第254號公告,公告顯示,中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、北京維德維康生物技術(shù)有限公司、北京明日達(dá)科技發(fā)展有限責(zé)任公司研制的非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒和鄭州中道生物技術(shù)有限公司、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所、廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物衛(wèi)生研究所、武漢華騰濟(jì)康生物科技有限公司、申聯(lián)生物醫(yī)藥(上海)股份有限公司、深圳市康百得生物科技有限公司研制的非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒符合獸藥產(chǎn)品要求,獲得農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)。風(fēng)途為您提供的就是鄭州中島生物技術(shù)有限公司的產(chǎn)品。
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）
英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）
［預(yù)期用途］
本試劑盒主要用于檢測疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV, African Swine Fever
Virus）核酸，適用于非洲豬瘟病毒的檢測、輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
【試劑盒組分】
1、試劑盒組成及貯藏條件
名稱 | 50 T | 貯藏條件 |
1、反應(yīng)液A | ImL | -20°C |
2、反應(yīng)液B | ImL | |
3、陽性對照 | 250μL | |
4、陰性對照 | 250μL | |
5、PCR反應(yīng)液 | 850μL | |
6、酶混合液 | 150μL |
2、需自備材料：生理鹽水、無菌槍頭、熒光PCR反應(yīng)管、記號筆等。
【操作步驟】
一、樣品制備
1、 血液樣品：采集抗凝血（抗凝劑為EDTA）或血清樣品，編號備用。
2、 組織樣品：采集脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g（黃豆粒大?。劭萍艏羲橛诮M織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨，再加1mL生理鹽水混勻，4°C條件下8000 rpm/分鐘離心2分鐘，取上清液于滅菌離心管中，編號備用。
二、DNA提取
取反應(yīng)液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻，室溫（20°C左右）靜置3分鐘，加入反應(yīng)液B 20μL,吹打混勻即可，若為抗凝全血，則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液。
二、PCR擴(kuò)增
1、配液：取出PCR反應(yīng)液、酶混合液，在室溫*融化后，充分混勻，瞬離，可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應(yīng)液中，充分混勻，瞬離后按每份20μL分裝使用；或按照每份PCR反應(yīng)液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗(yàn)用量，混合兩種反應(yīng)液,瞬離后按照每份20μL分裝到熒光PCR 反應(yīng)管中，剩余試劑立即凍存；（操作過程要注意避光）
2、加樣擴(kuò)增：分別向上述PCR反應(yīng)管中加入5μL樣本 DNA或陰性對照或陽性對照，混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運(yùn)行以下程序：
步驟 | 條件 | 循環(huán)數(shù) |
UNG處理 | 50°C： 2分鐘 | 1 |
預(yù)變性 | 95°C： 3分鐘 | 1 |
預(yù)擴(kuò)増 | 95°C： 8 秒 55C： 8 秒 | 5 |
PCR擴(kuò)增 | 95°C： 8 秒 55°C： 8 秒 | 40 |
熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個(gè)循壞的55°C時(shí)收集熒光信號。設(shè)置擴(kuò)增體系為25μL,同時(shí)要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式。
(注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說明書中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時(shí)間短無法運(yùn)行,可將預(yù)擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增條件變更為95°C： 5秒 55°C：30秒。)
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