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非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒即通用非瘟國(guó)家批文試劑盒廠家試劑盒

更新時(shí)間:2021-01-28      點(diǎn)擊次數(shù):1481

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通用非瘟國(guó)家批文試劑盒廠家試劑盒

當(dāng)豬的體溫下降至正常豬的體溫之后,能夠直接引發(fā)其死亡的現(xiàn)象,同時(shí),專(zhuān)家進(jìn)行研究表明,在豬瘟病毒發(fā)病的過(guò)程中,一般是通過(guò)對(duì)細(xì)胞溶解性感染的調(diào)節(jié),引發(fā)的樹(shù)突狀細(xì)胞無(wú)應(yīng)答,后致使淋巴細(xì)胞的凋亡,從而將多種病毒傳染到各個(gè)能夠引發(fā)發(fā)病的細(xì)胞中,將豬只整體的免疫系統(tǒng)破壞,這樣,就能夠建立起豬的持續(xù)性的傳染系統(tǒng)。

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng):病毒DNA提取試劑盒

英文名稱(chēng):Extraction Kit for Virus DNA

【預(yù)期用途】

本試劑盒主要用于疑似病毒等病原感染抗凝血、血淸、拭子、組織、飼料及環(huán)境中的病毒DNA的提取,純化的核酸可適用于各種常規(guī)操作及PCR試驗(yàn)。

【試劑盒組分】

I、試劑盒組成及貯藏條件

名稱(chēng)

20 T

50 T

1、吸附柱

20個(gè)

50個(gè)

2、收集管

20個(gè)

50個(gè)

3、裂解液

5 mL

11 mL

4、洗液I

13 mL

32 mL

5,洗液II

13 mL

32 mL

6.洗脫液

1.2 mL

3 mL

 

2、 保存條件及有效期:室溫下保存,有效期12個(gè)月.

3、 需自備材料:無(wú)水乙醇、1.5 mL無(wú)菌離心管、1.5 mL無(wú)菌離心管(長(zhǎng)臂型)、生理鹽水、研缽、無(wú)菌

1mL, 2OOuL、10uL槍頭、記號(hào)筆等。

【操作步驟】

一、樣品制備

1、 血液樣品:抗凝血樣品置離心管中,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上層血漿;非抗凝血樣品置離心 管中,待凝固后,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上層血清,置于滅菌離心管中,編號(hào)待檢。

2、 組織樣品:采集脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體等病變組織樣品0.1g.組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨,加入1 mL生理鹽水混勻,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心骨中,編號(hào)待檢。

3、 口腔液:進(jìn)食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉線綁紗布團(tuán)吸引動(dòng)物咀嚼,收集口腔液大于 500uL, 8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號(hào)待檢。

4、 飼料:取適量研磨后的飼料(約0.2g),放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP 管屮,振蕩混勻,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號(hào)待檢.

5、 灰塵:用無(wú)菌棉簽蘸取適量環(huán)境表面上的灰塵,放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP管中,振蕩混勻,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號(hào)待檢。

二、DNA的提取

1、取裂解液200uL加入無(wú)核酸酶1.5 mL離心曾屮,分別加入血漿/血清/組織液等樣品液200uL. 震蕩混勻10秒或顛倒混勻10次,室溫放置5分鐘(如果室內(nèi)溫度較低時(shí).需放置25C水浴溫育),再加入200uL無(wú)水乙醇,顛倒混勻10秒;若樣品渾濁則先12000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘處理,取上清液,以避免堵塞柱子;

2、 將液體轉(zhuǎn)入套有收集管的吸附柱中, 12000rpm離心1分鐘:

3、 棄收集管液體,向吸附柱中加600uL洗液I , 12000 rpm離心1分鐘;

4、 棄收集管液體,向吸附柱中加600uL洗液II, 12000 rpm離心I分鐘;

5、 棄收集管液體,12000 rpm離心2分鐘,以*去除殘留洗液;

6、將吸附柱轉(zhuǎn)入新的無(wú)核酸酸1.5mLEP管(長(zhǎng)臂型)中,向柱中央滴加50 uL洗脫液,靜置1分鐘, 12000 rpm離心1分鐘,EP管中液體即為病毒DNA。

【注意事項(xiàng)】

1、 實(shí)驗(yàn)前諾仔細(xì)閱讀本試劑盒說(shuō)明書(shū),嚴(yán)格按照操作步驟執(zhí)行.在操作過(guò)程中對(duì)時(shí)間、試劑體積等 粘確控制可以獲得好的結(jié)果。

2, 樣本應(yīng)新鮮采集使用,或低溫運(yùn)輸儲(chǔ)存;

3, 樣本具有潛在感染風(fēng)險(xiǎn),核酸的提取應(yīng)在核酸提取實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜中進(jìn)行。

4、 核酸提取冇關(guān)耗材確保高溫滅菌,提取后核酸盡快進(jìn)入下一步試驗(yàn)或冷凍保存待用。

5, 試劑使用前應(yīng)混合均勻,試劑具有一定腐蝕性,使用時(shí)請(qǐng)戴手套、做好防護(hù)。

6. 低溫下裂解液出現(xiàn)結(jié)晶數(shù)屬正常現(xiàn)象,可在60°C水浴加熱助溶后使用。

7、 實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)及時(shí)收集,遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行無(wú)害化處理。

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